Översikt och beredning av Icatibant-acetat

Översikt

Icatibant acetat är en sjukdomsspecifik behandling för hemangioid angiom (HAE) utvecklad av Shire, som fick FDA-godkännande den 25 augusti 2011, för hantering av akuta episoder av ärftligt angioödem hos vuxna 18 år och äldre. Det är också det tredje läkemedlet som godkänts av FDA för behandling av HAE-attacker. Icatibantacetat har en struktur som liknar en bradykininliknande d-dekapeptid men innehåller fem icke-proteinhärledda aminosyror. Det fungerar som en potent, selektiv kompetitiv antagonist av bradykinin typ 2 (B2)-receptorer, lindrar lokal svullnad, inflammation och smärta i samband med HAE-episoder genom att hämma effekterna av bradykinin. HAE representerar endast en av flera potentiella indikationer för vilka icatibant kan vara indicerat; andra potentiella tillämpningar inkluderar astma, levercirros och andra typer av angioödem. Följaktligen uppvisar icatibantacetat ett betydande terapeutiskt värde och breda marknadsutsikter.

Kemisk strukturformel förIcatibant acetat

EväsentligaIinformation

Kinesiskt namn:醋酸艾替班特

Engelskt namn: Icatibant acetat

Företags-ID：GT-F005

CAS：138614-30-9；130308-48-4

Sserienummer：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH   

Molekulär formel：C59H89N19O13S

Mmolekylvikt：1304.52

Icatibant acetat MS-spektrum

Syntetisk väg

1: Framställning av Fmoc-Arg(Pbf)-CTC-harts

Tillsätt 11,1 g 2-klortrifenylmetylikloridharts med en substitutionshastighet av 0,9 mmol/g till fastfasreaktionskolonnen, följt av tillsats av DMF-svälld harts under 30 minuter. Lägg till 3,50μL DIPEA till 12,98 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH och aktivera i 5 minuter; tillsätt sedan det DMF-svällda hartset och låt blandningen nå jämvikt efter 10 minuter. Lägg till ytterligare 3,50μL DIPEA, reagera vid rumstemperatur i 45 minuter och förslut slutligen med metanol i 20 minuter. Indunsta reaktionsblandningen, tvätta tre gånger med DMF, tre gånger med DCM och dra sedan ihop tre gånger med metanol under 3 minuter, 5 minuter respektive 8 minuter, vilket ger Fmoc-Arg(Pbf)-CTC-harts med en uppmätt substitutionshastighet på 0,5 mmol/g.

2：Koppling av Fmoc-Oic-ÅH

Väg 10 mmol Fmoc-Arg (Pbf)-CTC-harts och tillsätt den till en fastfasreaktor, sväll den i DMF i 0,5 h, ta sedan bort Fmoc-skyddet två gånger med 20 % DBLK-lösning i 10 min respektive 5 min; efter tvätt, konjugera den med Fmoc-Oic-OH. Lös 11,73 g Fmoc-Oic-OH, 4,9 g HOBt och 6,1 mL DIC i DCM (en liten mängd DMF kan tillsättas för solubilisering), aktivera blandningen i ett isvattenbad i 7 minuter, överför den sedan till fastfasreaktorn och reagera vid rumstemperatur i 1–2 h. Reaktionens slutpunkt bestäms med indantronmetoden. När reaktionsblandningen är klar, aspirera reaktionsblandningen, tvätta med DMF, ta bort Fmoc-skyddet två gånger med 20% DBLK-lösning i 10 minuter respektive 5 minuter, tvätta igen och förbered för koppling med nästa aminosyra.

3：Koppling av Fmoc-D-Cit-ÅH

Lös 11,91 g Fmoc-D-Cit-OH, 5,00 g HOAt och 11,4 g HATU i DCM (med en liten mängd DMF tillsatt för solubilisering). Tillsätt 3,87 g DIPEA under isvattenbad och aktivera i 7 minuter; överför sedan blandningen till en fastfasreaktor och reagera vid rumstemperatur i 1–2 timmar. Reaktionens slutförande bestäms med indiolmetoden. Efter reaktion, avlägsna reaktionsblandningen, tvätta med DMF och eliminera Fmoc-skyddet med 20 % DBLK-lösning. Efter tvätt, förbered för koppling med nästa aminosyra.

4：Koppling av Fmoc-Ser(tBu)-ÅH

Lös 11,49 g Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5,00 g HOAt och 6,1 ml DIC i DCM (med en liten mängd DMF tillsatt för solubilisering). Efter aktivering under isvattenbad i 7 minuter, överför blandningen till en fastfasreaktor och reagera vid rumstemperatur i 1–2 timmar; reaktionens slutförande bestäms med indiolmetoden. När reaktionsblandningen är klar, ta bort reaktionsblandningen, tvätta med DMF och eliminera sedan Fmoc-skyddet med 20 % DBLK-lösning, följt av tvättning innan du fortsätter till kopplingen med nästa aminosyra.

5：Koppling av Fmoc-Thi-ÅH

Lös 11,79 g Fmoc-Thi-OH, 5,00 g HOBt och 11,37 g HBTU i DCM (med en liten mängd DMF tillsatt för solubilisering). Tillsätt 3,87 g DIPEA under isvattenbad och aktivera i 7 minuter; överför sedan blandningen till en fastfasreaktor och tillåt reaktion vid rumstemperatur i 1–2 timmar. Reaktionens slutförande bestäms med indiolmetoden. Efter reaktion, avlägsna reaktionsblandningen, tvätta med DMF och eliminera Fmoc-skyddet med 20 % DBLK-lösning. Efter tvätt, förbered för koppling med nästa aminosyra.

6：Koppling av Fmoc-Gly-ÅH

Lös 8,91 g Fmoc-Gly-OH, 5,00 g HOBt och 9,63 g TBTU i DCM (med en liten mängd DMF tillsatt för solubilisering). Tillsätt 3,63 g TMP under isvattenbad och aktivera i 7 minuter; överför sedan blandningen till en fastfasreaktor och tillåt reaktion vid rumstemperatur i 1–2 timmar. Reaktionens slutförande bestäms av indanonmetoden. Efter reaktion, avlägsna reaktionsblandningen, tvätta med DMF och eliminera Fmoc-skyddet med 20 % DBLK-lösning. Efter tvätt, förbered för koppling med nästa aminosyra.

7：Koppling av  Fmoc-Hyp(tBu)-ÅH

Lös upp 12,27 g Fmoc-Hyp(tBu)–ÅH, 5,00 g HOAt och 9,66 g TATU i DCM (med en liten mängd DMF tillsatt för solubilisering). Tillsätt 3,63 g TMP under isvattenbad och aktivera i 7 minuter; överför sedan blandningen till en fastfasreaktor och reagera vid rumstemperatur i 1–2 timmar. Reaktionens slutpunkt bestäms med indiolmetoden. Efter avslutad, ta bort reaktionsblandningen, tvätta med DMF och eliminera Fmoc-skyddet med 20 % DBLK-lösning. Efter tvätt, förbered för koppling med nästa aminosyra.

8：Koppling av Fmoc-Pro-ÅH

Lös 10,11 g Fmoc-Pro-OH, 5,00 g HOAt och 11,4 g HATU i DCM (med en liten mängd DMF tillsatt för solubilisering). Tillsätt 3,87 g DIPEA under isvattenbad och aktivera i 7 minuter; överför sedan blandningen till en fastfasreaktor och reagera vid rumstemperatur i 1–2 timmar. Reaktionens slutpunkt bestäms med indiolmetoden. Ta bort reaktionsblandningen när den är klar, tvätta med DMF och eliminera Fmoc-skyddet med 20 % DBLK. Efter tvätt, förbered för koppling med nästa aminosyra.

9：Koppling av Fmoc-Arg(Pbf)-ÅH

Lös 19,44 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt och 11,4 g HATU i DCM (med en liten mängd DMF tillsatt för solubilisering). Tillsätt 3,87 g DIPEA under isvattenbad och aktivera i 7 minuter; överför sedan blandningen till en fastfasreaktor och reagera vid rumstemperatur i 1–2 timmar. Reaktionens slutförande bestäms med indiolmetoden. Efter reaktion, avlägsna reaktionsblandningen, tvätta med DMF och eliminera Fmoc-skyddet med 20 % DBLK-lösning. Efter tvätt, förbered för koppling med nästa aminosyra.

10：Koppling av Fmoc-D-Arg(Pbf)-ÅH

Lös 19,44 g Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt och 11,4 g HATU i DCM (med en liten mängd DMF tillsatt för solubilisering). Tillsätt 3,87 g DIPEA under isvattenbad och aktivera i 7 minuter; överför sedan blandningen till en fastfasreaktor och reagera vid rumstemperatur i 1–2 timmar. Reaktionens slutpunkt bestäms med indiolonmetoden. Efter avslutad reaktion, ta bort reaktionsblandningen, tvätta med DMF och använd sedan 20 % DBLK för att ta bort Fmoc-skyddet. Tvätta tre gånger med DMF, tre gånger med DCM och tre gånger med metanol för sammandragning (under 3 minuter, 5 minuter respektive 8 minuter), följt av vakuumtorkning för att erhålla etibant peptidacetatharts.

HPLC-kromatogram av Icatibant-acetat

11：Hartspyrolys av Icatibantacetat

Bered 200 mL lysreagens innehållande 190 mL trifluorättiksyra, 6 mL triisopropylsilan och 4 mL vatten och förkyla det i ett kylskåp i 30 minuter. Tillsätt 20,0 g etibant-peptidacetatharts till en 500 ml rundbottnad kolv, tillsätt sedan det förberedda 200 ml-lysreagenset till hartset under omrörning under ett isbad och under kväveflöde. Efter 30 minuters reaktion, avlägsna isbadet och fortsätt reaktionen vid rumstemperatur i 2 timmar. Filtrera hartset och samla upp filtratet. Tvätta hartset med en liten mängd trifluorättiksyra, filtrera och kombinera filtraten. Tillsätt gradvis filtratet till 20 1 iskall eter; en vit fällning bildas. Centrifugera vid 3000 rpm för att samla upp fällningen, tvätta fem gånger med iskall eter och torka under reducerat tryck för att erhålla 10,3 g rå peptid med HPLC-renhet >90 %.